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來了解一下細胞因子的生物學(xué)測定法

發(fā)布日期: 2019-04-26
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      根據(jù)細胞因子特定的生物學(xué)活性,應(yīng)用相應(yīng)的指示系統(tǒng),如各種依賴性細胞株或靶細胞,同時與標準品對比測定,從而得知樣品中細胞因子的活性水平,一般以活性單位(U/mL)表示。生物學(xué)活性檢測法所用的靶細胞可直接從組織中分離,如骨髓細胞的集落形成試驗和胸腺細胞(脾細胞)的增殖試驗,或用體外培養(yǎng)的依賴細胞因子才能生長的細胞因子依賴株及對細胞因子殺傷敏感的細胞作為靶細胞。其測定方法可分為促進細胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性測定法、集落形成法、趨化作用測定法及細胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)物測定法等。
  促進細胞增殖和增殖抑制法:目前已建立的應(yīng)用依賴細胞株檢測各種細胞因子的方法,其操作過程基本相同。檢測細胞因子促生長活性或抑制生長活性是將不同稀釋度的待測樣品或細胞因子標準品與培養(yǎng)的細胞株共同培養(yǎng)一定時間,然后檢測增殖的細胞數(shù)。前者的增殖細胞數(shù)與細胞因子的含量成正比,而后者的增殖細胞數(shù)與細胞因子的含量成反比。常用的檢測細胞增殖的方法有3H-TdR摻人法、比色法、染色法和直接計數(shù)法等。其中測定細胞代謝酶活性反映細胞增殖數(shù)量的比色法包括MTY、XTF、MTS和NAG等方法,可在酶標儀上自動化檢測,且不接觸核素,較為常用。此外,測定代謝產(chǎn)物熒光強度的方法也可檢測增殖細胞數(shù),如ATP法和cAMP法。細胞因子還能誘導(dǎo)靶細胞表達某些表面分子或分泌一些蛋白質(zhì),可以用熒光素標記抗體檢測表達相應(yīng)分子的細胞數(shù),或用特定方法測定細胞分泌的蛋白質(zhì),間接了解細胞因子的活性。
  各種集落刺激因子(CSF)作用于造血系統(tǒng)的不同細胞,可促進其增殖及在半固體瓊脂凝膠系統(tǒng)中克隆培養(yǎng)骨髓細胞的集落形成,故可采用集落形成試驗研究CSF的水平。